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甲型肝炎病毒 RT-PCR 检测试剂盒

提供者:上海雅吉生物科技有限公司   发布时间:2019/8/20  阅读次数:85次   进入该公司展台

 

产品及特点

甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus,HAV)会引起甲型肝炎,该病毒病毒主要通过粪、口途径传播,传染源多为病人。甲型肝炎的潜伏期为 15~45 天,易感群体多为儿童及青年,发病率随年龄增长而递减,感染后临床表现多从发热、疲乏和食欲不震开始,继而出现肝肿大压痛、肝功能损害,部份患者可出现黄疸。该病毒的感染对人体健康有较大损害,因此快速灵敏诊断具有重要意义。为此本公司开发了本产品,可用于在科研领域快速定量检测甲型肝炎病毒。它具有下列特点:

1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2. 根据甲型肝炎病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 30μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。

规格及成分

 

编号

十孔盒包装

 

双酶一管式 RT-PCR Buffer

91202a

200 μL(橙盖)

MMLV-Taq Mix

91202b

75 μL(红盖)

超纯水

100935

1 mL(蓝盖)

甲型肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液

13-15700yw

100 μL(白盖)

甲型肝炎病毒 RT-PCR 阳性对照

1×10E8 拷贝/μL

13-15700pc

50 μL(黄盖)

天净沙核酸释放剂(试用装)

61202a

20 次(1mL)

使用手册

13-15700sc

1 份

注:为避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供甲型肝炎病

毒专一的 DNA 片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分

开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。

自备试剂

样品 RNA

使用方法

一、样品 RNA 的制备

1.如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对,一个是 NC样品制备阴性对照。可以用 10μL  甲型肝炎病毒 PCR 阳性

对照的 10000 倍稀释的稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL10μL 相当于 1 


拷贝,可以将 10μL 原液加入到 990μL  自备TE 溶液中,充分混匀,此为 100倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL  自备 TE 溶液中,充分混匀,此 10000 倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装,其使用手册可以从本公司网站搜索天净沙核酸释放剂或产品编号 61202 下载。

二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)

3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 PCR 额外增加的两个管一个是 RT-PCR

阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:

 

成份

N+2 个

样品管

RT-PCR

阴性对照

RT-PCR

阳性对照

双酶一管式 RT-PCR Buffer

4 μL

4 μL

4 μL

甲型肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 个制备的样品

各 12.5 μL

不加

不加

甲型肝炎病毒 RT-PCR 阳性对照

10000 倍稀释液

不加

不加

12.5 μL

MMLV-Taq Mix

1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:

 

过程

温度

时间

逆转录

42℃

60 分钟

预变性

95℃

5 分钟

 

PCR 反应

(35 个循环)

95℃

30 秒

55℃

30 秒

72℃

30 秒

延伸

72℃

5 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果,阳性样品预期得到的扩增产物长度为 192bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有此扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。


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