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“劲马生物”产品文献:高糖腹透液对腹膜间皮细胞分泌VEGF 的影响及氟伐他汀的干预作用

提供者:上海elisa生物技术有限公司   发布时间:2019/4/16  阅读次数:118次   进入该公司展台

 高糖腹透液对腹膜间皮细胞分泌VEGF 的影响及氟伐他汀的干预作用

武 侠,刘 佳*,刘艳春,徐亚光,赵秀芬,钱 军,邢昌赢
(南京医科大学第一附属医院肾内科,江苏 南京 210029)



[摘 要] 目的:观察氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导的人腹膜间皮细胞
(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。 方法:体外培养 HPMCs,同步化 48 h 后,分组如下:正常对照组、HGPDS 组、HGPDS+Flu 组、单纯 Flu 组。 倒置显微镜观察各组细胞形态, RT-PCR 法检测各组 VEGF 的 mRNA 表达,Western blot 检测各组 VEGF 蛋白的表达。 结果:与正常对照组相比,在 HGPDS 作用下,48 h 后细胞由铺路石样转变为长梭形,1 × 10-6 mol / L Flu 可部分逆转 HPMCs 的形态改变。 与正常对照组相比, 在 HGPDS作用下,人腹膜间皮细胞 VEGF mRNA 及蛋白表达明显增多(P < 0.05),并呈时间依赖性,VEGF mRNA 和蛋白分别在 HGPDS干预后 12 h 和 48 h 达高峰(P < 0.05)。 Flu 可明显抑制 HGPDS 诱导的 VEGF 的表达(P < 0.05),并呈浓度依赖性。 结论:适当浓度的 Flu 可以抑制 HGPDS 刺激体外培养人腹膜间皮细胞 VEGF 表达增加。
[关键词] 氟伐他汀;高糖腹透液;人腹膜间皮细胞;血管内皮生长因子
[中图分类号] R392.12 [文献标志码] A [文章编号] 1007-4368(2013)06-754-05
doi:10.7655 / NYDXBNS20130608


The effect of high-glucose peritoneal dialysate and fluvastatin on the expression of vascular endothelial growth factor in human peritoneal mesothelial cells
Wu Xia,Liu Jia*,Liu Yanchun,Xu Yaguang,Zhao Xiufen,Qian Jun,Xing Changying
(Departmentof Nephrology,the First Affiliated Hospital of NJMU,Nanjing 210029,China)

[Abstract] Objective:To explore the effect of high-glucose peritoneal dialysate (HGPDS) and fluvastatin (Flu) on the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in human peritoneal mesothelial cells (HPMCs). Methods:After incubated in DMEM with 0.01% FBS for 48 h, HPMCs were randomly divided as follows:control group, HGPDS group, HGPDS+Flu group, Flu alone group. The phenotype changes of HPMCs were observed by light microscopy. The mRNA expression of VEGF was observed by RT- PCR. HPMCs were treated for 48 h and the levels of VEGF protein were measured by Western blot. Results:Compared with the normal control group, after incubation with HGPDS for 48 h, the cell morphology was changed from a typical cobblestone-like appearance to fibroblast-like appearance. Flu (1 × 10-6) mol / L could partially improved the cell morphology changed by HGPDS. The mRNA and protein expressions of VEGF increased time dependently in HPMCs treated with HGPDS (P < 0.05), which peaked at 12 h and 48 h, respectively. Flu significantly inhibited the effects of HGPDS on the expression of VEGF in a dose-dependent manner(P
< 0.05). Conclusion: Flu could decrease VEGF expression in HPMCs which was induced by HGPDS.
[Key words] fluvastatin;high glucose peritoneal dialysate;human peritoneal mesothelial cells;vascular endothelial growth factor
[Acta Univ Med Nanjing,2013,33(6):754-758]





腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)已经成为终末期肾脏病(end stagerenal disease,ESRD)的主要替代


[基金项目] 国家自然科学基金资助(81170660);江苏省科技厅基础研究计划(自然科学基金)( BK2011849);江苏省卫生厅科研基金资助(H200317)
*通信作者(Corresponding author),E-mail:jiajj3@sina.com


治疗之一。长期的腹膜透析将导致腹膜功能的衰竭, 腹膜功能的保护是腹膜透析面临的问题之一。 腹膜表面的间皮细胞能够分泌多种物质, 在长期的腹膜透析过程中, 会通过分泌转化生长因子-β(trans- forming growth factor-β,TGF-β)、血管内皮生长因子
(vascular endothelial growth factor,VEGF) 等增加来

第 33 卷第 6 期
2013 年 6 月


武 侠等:高糖腹透液对腹膜间皮细胞分泌 VEGF 的影响及氟伐他汀的干预作用


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改变腹膜的功能[1-3]。 现在用的腹膜透析液多为非生物相容性的,葡萄糖透析液就为最常用的一种,葡萄糖透析液由于含有多种葡萄糖降解产物(GDP),这些物质会改变腹膜正常结构,使间皮下基质增多,血管增生,通透性增加,最终可能发展为超滤衰竭[4]。有报道 VEGF 在腹膜的通透性增加及血管增生方面发挥重要作用[5]。 本研究旨在探讨高糖腹透液(high- glucose peritoneal dialysate,HGPDS) 对人腹膜间皮细胞 (human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)分泌 VEGF 的作用及氟伐他汀对腹膜间皮细胞的保护作用,此类作用尚未见文献报道。
1材料和方法
1.1材料
人腹膜间皮细胞株(HMrSV5,上海劲马生物科技有限公司);氟伐他汀(fluvastatin,Flu,粉剂,北京诺华公司馈赠);DMEM 培养基(粉剂)、青链霉素和胎牛血清(Gibco 公司, 美国);4.25% 葡萄糖腹膜透析液(Baxter 公司, 美国);TRIZOL、RT-PCR 试剂盒
(TaKaRa 公司, 日本); 兔抗人 VEGF 多克隆抗体
(Abcam 公司,美国);鼠抗人 GAPDH 单克隆抗体(武汉博士德公司)。
1.2方法
1.2.1细胞培养
HMrSV5 细胞在 37℃、5%CO2 的培养箱内生长, 所用完全培养基为 DMEM 培养基(含葡萄糖浓度为
5.5 mmol / L)添加 10%胎牛血清、链霉素 100 U / L 和

青霉素 100 U / L。 2~3 d 换液,待长满后用 0.25%的胰蛋白酶消化传代,用于实验的为第 5~10 代细胞。
1.2.2细胞形态观察
体外培养 HPMCs,同步化 48 h 后,分组如下:正常对照组、HGPDS 组、 单纯 Flu 组、HGPDS+Flu 组。培养 48 h 后在倒置显微镜下观察细胞形态变化。
1.2.3实验分组
HPMCs 被同步化 48 h 后,分为:①正常对照组
(DMEM 培养基与完全培养基 1∶1 稀释); ②HGPDS组 (按 1∶1 的比例稀释 4.25%腹膜透析液和 DMEM 完全培养基, 分别刺激 0、6、12、24 h); ③HGPDS+ Flu (按 1∶1 的比例稀释 4.25%腹膜透析液和 DMEM 完全培养基, 所加 Flu 浓度为1 × 10-6、1 × 10-7、1 × 10-8 mol / L)组;④单纯 Flu(按 1∶1 的比例稀释 DMEM和完全培养基,氟伐他汀浓度为 1 × 10-6 mol / L)组,按分组条件均干预细胞 12 h。 干预结束后收集细胞。
1.2.4RT-PCR 检测 VEGFmRNA 表达
用 TRIzol 法提取细胞总 RNA,分光光度计测定浓度后,从总 RNA 中取 1.0 g 进行逆转录获得 cD- NA,反应体系为 10 μl。 取 1 μl cDNA 模板进行 PCR 扩增,该反应体系为 25 μl。GAPDH 作为内参,其特异性引物由上海英俊生物工程有限公司合成
(表 1),扩增结束后后分别取 PCR产物各 8 μl,2.5%琼脂糖凝胶电泳(含 0.6 pg / ml 溴化乙锭),紫外灯下观察结果。 图像分析软件进行 PCR 条带灰度扫描, 以 GAPDH 为内参作半定量分析,数值以两者吸光度比值表示。 同一实验重复 3次。
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