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技术文章

MS培养基配制标准操作步骤

点击次数:10160 发布时间:2013/7/26 8:47:33

 实验步骤

1  MS培养基母液的母液的配制
       由于组培的植物不同,需要配制不同的培养基,为减少工件量,可把药品配成浓缩液。有些微量元素和有机成分成分浓度极低,因此,先配制成母液的母液。建议浓度如下表: 
 
药品名称
配制的终浓度
配制50ml的总质量(g)
烟酸
0.01g/ml
0.5
VB6
0.1g/ml
5
甘氨酸
0.2g/ml
10
NaMoO4.2H2O
0.05g/ml
2.5
CuSO4.5H2O
0.05g/ml
2.5
KI
0.1g/ml
5
H3BO3
0.062g/ml
3.1
MnSO4. H2O
0.169g/ml
8.45
ZnSO4. 7H2O
0.172g/ml
8.6
CoCl.6H2O
0.05g/ml
2.5
VB1
0.1g/ml
5
 
  母液的母液的配制过程:
 
(1)根据表中的浓度,称取50ml体积的药品的质量。
(2)加入到相应的溶液中,定容至50ml。
(3) 放入密封50ml塑胶管中,-20℃保存。

2  MS培养基母液浓度表:
(1)MS-A(macro):为工作液浓度的50倍
 
NH4NO3
41.25g/500ml
 KNO3
47.5g/500ml
MgSO4·7H2O
9.25g/500ml
KH2PO4
9.25g/500ml
        (2)MS-B(micro):为工作液浓度的100倍
     
H3BO3
0.124g/200ml
MnSO4·4H2O
0.338g/200ml
ZnSO4·7H2O
0.172g/200ml
CuSO4·5H2O
0.0005g/200ml
CoCl2·6H2O
0.0005g/200ml
KI
0.0166g/200ml
Na2MoO4·2H2O
0.005g/200ml
        (3) MS-C:为工作液浓度的100倍
CaCl2·2H2O
22.0g/500ml
        (4) MS-D:为工作液浓度的100倍
烟酸
0.01g/200ml
VB6
0.01g/200ml
VB1
0.002g/200ml
甘氨酸
0.04g/200ml
 
  (5)MS-E:为工作液浓度的100倍
Na2-EDTA
3.725g/500m
FeSO4·7H2O
2.875g/500m
 
 3  母液的配制
    MS-A:称取NH4NO3  41.25g、KNO3 47.5g、MgSO4·7H2O 9.25g、KH2PO4 9.25g, 蒸馏水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
    MS-B:吸取母液的母液如下,蒸馏水定容至200ml。4℃的冰箱中保存。

 
母液的母液量
母液终浓度
H3BO3
 
0.124g/200ml
MnSO4·4H2O
 
0.338g/200ml
ZnSO4·7H2O
 
0.172g/200ml
CuSO4·5H2O
 
0.0005g/200ml
CoCl2·6H2O
 
0.0005g/200ml
KI
 
0.0166g/200ml
Na2MoO4·2H2O
 
0.005g/200ml

    MS-C:称取CaCl2·2H2O 22.0g蒸馏水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
    MS-D:吸取母液的母液如下,蒸馏水定容至200ml。4℃的冰箱中保存.
 
母液的母液量
母液终浓度
烟酸
 
0.01g/200ml
VB6
 
0.01g/200ml
VB1
 
0.002g/200ml
甘氨酸
 
0.04g/200ml
 
   MS-E:称取Na2-EDTA 3.725g 、FeSO4·7H2O 2.875g蒸馏水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中避光保存。

4  
MS培养基基本工作液的配制 
     MS培养基基本工作液质量表
组成成分
数量(mg/l)
组成成分
数量(mg/l)
NH4NO3
1650
Na2-EDTA
37.3
KNO3
1900
FeSO4·7H2O
27.8
CaCl2·2H2O
440
CuSO4·5H2O
0.025
MgSO4·7H2O
370
蔗糖
30
KH2PO4
170
肌醇
100.0
KI
0.83
烟酸
0.5
H3BO3
6.2
盐酸吡哆醇
0.5
MnSO4·4H2O
22.3
甘氨酸
2.0
ZnSO4·7H2O
8.6
盐酸硫铵等
0.4
Na2MoO4·2H2O
0.25
 
 
CoCl2·6H2O
0.025
pH
5.8

    (1)配制1升工作液,烧杯中放入700ml左右的蒸馏水,按顺序分别吸取MS-A母液20ml、MS-B母液10ml、MS-C母液10ml、MS-D母液10ml、MS-E母液10ml。
    (2)加入固体蔗糖30g(根据具体实验调节浓度),溶解。
    (3) 加入所需的激素。定容至1000ml。
    (4)0.1-1mol/l的HCl或NaOH调整pH值。
    (5)如果配制固体培养基加入一定浓度的琼脂。琼脂浓度为10%~15%。
    (6) 液体培养基可选择高温高压灭菌和过滤消毒2种方法。固体培养基采用高温高压灭菌方法。倒入三角瓶等培养器皿中,封口消毒。
    (7)工作液配制的注意事项:
           由于培养基内有丰富的营养物质,极利细菌和真菌繁殖,造成污染,影响组培的成功,一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。
           高温高压消毒: 一般用消毒锅消毒,注意消毒锅不能装的过满,锅内保持1.1Kg/cm2的压力,温度120℃左右,大约15-20分钟即可。
           过滤消毒: 一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高温高压法消毒,可用过滤消毒,可过滤消毒后再加入已高温高压消毒的培养基中,过滤消毒应在无菌室或超净工件台上进行,以避免污染培养基。

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